色谱柱的使用方法、注意事项以及保存方法 |
色谱柱目前主要应用于生物化学、药物及临床剖析，具有分离效能高、剖析速度快、检测灵活度康复等特点。色谱柱发展至今已形成多种多样的专用色谱柱，比如制备柱、剖析柱和各种微型柱，但色谱柱主体上仍由柱体、柱内填料和两端的接头组成。不知道大家有没有这样的体会，就是色谱柱使用一段工夫后会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留工夫扭转等变化，如不采取措施，将会缩短色谱柱的使用寿命，影响工作效率，并造成一定的经济损失。 色谱柱的使用办法 加装爱护柱：爱护柱属耗费品，经过一定次数的样品剖析(50~100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换爱护柱。 过滤流动相和样品：流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成，原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别。 净化样品：样品中含有对色谱柱有侵害的化学成分，如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。 避免过高的柱压：避免的办法为(1)柱压过高时，尽可能采用较小的流速，以不超过柱最大允许压力的一半为宜。(2)当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。(3)使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。 色谱柱使用留神事项 1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的忽然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的忽然升高或降低也会激动柱内填料，因此，在调节流速时应该迟缓进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。 2.应逐渐扭转溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂扭转为全部是水，反之亦然。 3.一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱能够反冲时，能力够反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 4.选择使用合适的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏。有时能够在进样器前面连贯一预柱，剖析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免剖析柱中的硅胶基质被溶解。 色谱柱保留办法 当色谱柱不使用的时候，就把柱二端包起来，放到盒子里室温避光保留。毛细管柱能够用废旧的隔垫裁成二块，分别插在毛细管二段。填充柱用小化工中间体（氟草烟甲酯）农药中间体袋套住，再用细金属丝扎起来。因为剖析室有许多化学试剂，特别在橱内会有些气味，这样能较康复保管色谱柱。放置时也要有序放置，毛细管柱还是用盒子装康复以免压坏，在放置时在柱上和记录本上都做康复记录。拆下后，两头用橡胶垫密封，橡胶垫原本色谱盒子就带有，如果没有，用进样垫制作一下就能够了，然后装在原来的色谱盒子里面，备注上相应的信息。通常要求放在干燥的地方，下次使用时，切记进样端和出口端不能装反。
